含伯氨基的生物分子的 lumiprobeNHS 酯标记

来自 : 发布时间：2024-11-15

NHS Ester Labeling of biomolecules Containing Primary Amino Groups

NHS（N-羟基琥珀酰亚胺）酯和其他活性酯（磺基-NHS、磺基四氟苯基-STP）是适合修饰氨基的反应性化合物。 NHS是最常见的活性酯类。

通常的修饰是荧光标记、荧光猝灭剂和其他报告基团。炔烃和叠氮基可以使用活性酯进行连接，使生物分子适应点击化学。

特别常见的是蛋白质和肽的修饰，因为它们几乎总是包含氨基。其他例子包括氨基寡核苷酸的修饰、氨基修饰的 DNA 和含氨基的糖。

NHS 酯与氨基的反应具有很强的 pH 依赖性：在低 pH 值下，氨基被质子化，修饰不会发生。在高于最佳 pH 值时，NHS 酯的水解速度很快，并且e 修饰分子的产率降低。修饰的最佳pH值为8.3-8.5。

水是最常用的溶解NHS酯类的生物分子标记溶剂。如果NHS酯在水溶液中溶解性差，可以先溶解在二甲基亚砜（DMSO）或二甲基甲酰胺（DMF）中，然后加入到pH8.3-8.5的蛋白质​​缓冲溶液中。请注意，DMF 可降解为二甲胺，二甲胺具有鱼腥味，可与活性酯发生反应。因此，要标记生物分子，使用不含二甲胺且无鱼腥味的高质量 DMF 非常重要。

我们建议使用以下通用协议使用 Lumiprobe 生产的 NHS 酯标记生物分子：使用以下公式计算所需的 NHS 酯量或我们的蛋白质标记计算器：NHS_ester_weight [mg] = 8 × amino_compound_weight [mg] × NHS_ester_molar_weight [Da]/amino_compound_molar_weight [Da].8 是 NHS 酯的摩尔过量。伊蒂桑姆皮尔单标记的实际价值，适用于许多常见的蛋白质和肽。然而，在某些情况下，使用更少或更多的 NHS 酯可以增加修饰生物分子的产量。它取决于蛋白质结构、用于标记的试剂及其溶解度。 Lumiprobe产品的摩尔量可以在相应的产品页面上找到。例如，要用Cy5NHS酯（摩尔量616道尔顿）标记3mg BSA（摩尔量66500道尔顿），并获得单标记产品的最大产量，应使用8×3mg×616Da / 66500Da = 0.22mg Cy5 染料 NHS 酯。计算反应混合物的体积。标记反应中的最佳生物分子浓度为每毫升 1-10 毫克。标记可以在任何规模上进行，从纳摩尔到几十克。如果标记少量生物分子，请将反应混合物的体积保持在最小值 (10-20uL)。将 NHS 酯溶解在 1/10 反应体积的水、DMF 或 DMSO 中。不含二甲胺的 DMF 或水是优选的溶剂。 NHS 酯溶酶lved inDMF 可在 −20ºC 下保存 1-2 个月。 NHS酯的水溶液配制后应立即使用。将生物分子溶解在 9/10 反应体积的 pH8.3-8.5.0.1M 的缓冲液中，碳酸氢钠溶液具有合适的 pH 值。另一种选择是 0.1M 磷酸盐缓冲液。请注意，pH 是用 NHS 酯成功标记生物分子的最重要因素。避免使用含有胺类的缓冲液（有时可以使用基于 Tris 的缓冲液，但不推荐使用。Tris 含有氨基，但对活性酯的亲和力很低）。在进行大规模标记时（使用数百毫克的 NHS 酯），请注意混合物倾向于酸化随着时间的推移，因为 NHS 酯的水解。监测 pH 值，或使用浓度更高的缓冲液。将 NHS 酯溶液加入到生物分子溶液中，并涡旋均匀。一次过夜，或在室温下放置 1 至 4 小时。使用适当的方法纯化偶联物：大分子凝胶过滤是最常见的。色谱法是另一种选择。对于蛋白质和核酸，可以使用乙醇或丙酮沉淀。有机杂质（如 N-羟基琥珀酰亚胺、NHS 酯和水解产生的酸）几乎总是可以通过这些方法轻松分离。相关产品 BDP 564/570 NHS 酯亲液性硼二吡咯亚甲基染料，具有橙色发射，用于标记伯胺和仲胺基团。显示定价隐藏定价目录。 #QuantityPriceLead timeBuy this product1H4201 mg110.00$库存2H4205 mg210.00$in stock4H42025 mg410.00$in stock5H42050 mg695 .00$库存6H420100 mg1190.00$现货批量询价数量 *SalutationFull name *Company *PhoneEmail *СommentSend requestBDP 576/589 NHS esterBDP 576/589 NHS ester (BODIPY™ 576/589 analog) 是一种明亮的疏水染料在橙色光谱范围内发射。它可用于荧光各向异性测定。显示定价隐藏定价Cat。 #QuantityPriceLead timeBuy this product1G4201 mg110.00$in stock2G4205 mg210.00$in stock4G42025 mg410.00$库存5G42050 mg695.00$库存6G420100 mg1190.00$库存批量询价数量 *称呼姓名*Company *PhoneEmail *СommentSend requestBDP 581/591 NHS esterNHS ester derivative of BDP 581/591 borondipyrromethene fluorophore 为 l蛋白质、肽和其他生物分子的标记。该染料可用于荧光偏振和双光子实验，并可用作 ROS 探针。显示定价隐藏定价Cat。 #QuantityPriceLead timeBuy this product164201 mg110.00$in stock264205 mg210.00$in stock4642025 mg410.00$in stock5642050 mg695.00$库存66420100 mg1190.00 $有货批量询价数量 *SalutationFull name *Company *PhoneEmail *СommentSend requestBDP R6G NHS esterBDP R6G 是一种硼二吡咯亚甲基染料，其吸收和发射光谱与 R6G 相似。显示定价隐藏定价Cat.#QuantityPriceLead timeBuy this product144201 mg110.00$库存244205 mg210.00$in stock4442025 mg410.00$库存 5442050 mg695。 00$in stock64420100 mg1190.00$库存批量询价数量 *称呼姓名*公司 *电话邮箱 *Сomment发送请求BDP TR X NHS esterBDP TR X NHS ester 是 BDP TR 的衍生物，含有基于氨基己酸 (C6) 的长连接子。该染料具有接近 ROX 的吸收和发射。NHS 酯功能可用于结合蛋白质和肽。显示定价隐藏定价Cat。#QuantityPriceLead timeBuy this product1D4201 mg110.00$库存2D4205 mg210.00$库存4D42025 mg410.00$库存5D42050 mg695.00$库存6D420100 mg1190.00$现货批量询价数量 *SalutationFull name *Company *PhoneEmail *СommentSend requestCyanine3.5 NHS esterCyanine3.5 dye NHS ester derivative.显示定价隐藏pricingCat. #QuantityPriceLead timeBuy this product120201 mg110.00$in stock220205 mg210.00$in stock4202025 mg410.00$5 days5202050 mg695.00$库存62020100 mg1190.00$库存批量询价Q数量 *SalutationFull name *Company *PhoneEmail *СommentSend requestCyanine3B NHS esterCyanine3B NHS ester 是一种荧光量子显着增加的活性染料生物分子中氨基特定标记的产量和光稳定性。显示定价隐藏定价Cat。 #QuantityPriceLead timeBuy this product193201 mg140.00$in stock293205 mg340.00$库存4932025 mg990.00$in stock5932050 mg1690.00$in stock69320100 mg3100.00$8天批量询价数量 *SalutationFull name *Company *PhoneEmail *СommentSend requestDusQ 1 NHS 酯功能化粉尘Q 1 淬灭剂衍生物，淬灭范围为 480 - 580 nm，用于标记含胺分子。显示定价隐藏定价Cat。 #QuantityPriceLead timeBuy this product21D205 mg– 库存示例请求41D2025 mg315.00$in stock51D2050 mg580.00$in stock61D20100 mg885.00$库存样品申请数量 *SalutationFull name *Company *PhoneEmail *СommentSend requestDusQ 2 NHS esterDusQ 2 暗猝灭剂，猝灭范围为 560 - 670 nm，用于合成 FRET 探针的伯胺反应性。这种 NHS 酯可以与带有氨基的各种分子偶联。显示定价隐藏定价目录。#QuantityPriceLead timeBuy this product22D205 mg– 有货示例请求42D2025 mg315.00$库存52D2050 mg580.00$库存62D20100 mg885.00$库存样品请求数量 *SalutationFull name *Company *PhoneEmail *СommentSend requestDusQ 3 NHS esterAmino-reactive NHS用于标记远红淬灭剂 DusQ 的酯 3.显示定价隐藏定价Cat. #QuantityPriceLead timeBuy this product23D205 mg– 库存示例请求43D2025 mg315.00$in stock53D2050 mg580.00$in stock63D20100 mg885.00$库存样品申请数量 *SalutationFull name *Company *PhoneEmail *СommentSend requestHEX NHS ester, 6-isomerNHS-ester of HEX dye for proteins, peptides, and modified oligonucleotides labeling via reaction with amino 标签组。显示定价隐藏定价猫。 #QuantityPriceLead timeBuy this product2B2205 mg175.00$现货批量询价数量 *SalutationFull name *Company *PhoneEmail *СommentSend requestPyrenebutyric acid NHS esterPyrene NHS ester 用于用芘残基标记生物分子。芘是一种荧光邻近探针，可形成准分子，也是石墨固定的锚定基团。显示定价隐藏定价Cat. #QuantityPriceLead timeBuy this product63520100 mg110.00$现货批量询价数量 *SalutationFull name *Company *PhoneEmail *СommentSend requestsulfo-Cyanine3.5 NHS esterAmine reactive activated ester of water soluble, sulfonated sulfo-Cyanine3.5 dye.显示定价隐藏定价Cat. #QuantityPriceLead timeBuy this product123201 mg110.00$库存223205 mg290.00$库存4232025 mg690.00$5 days5232050 mg1270.00$库存62320100 mg1990 .00$有货批量询价 数量 *SalutationFull name *Company *PhoneEmail *СommentSend requestsulfo-Cyanine3 NHS ester水溶性sulfo-Cyanine3 SE活化酯用于氨基生物分子标记.显示定价隐藏定价猫。 #QuantityPriceLead timeBuy this product113201 mg110.00$in stock213205 mg210.00$in stock4132025 mg410.00$库存5132050 mg695.00$in stock61320100 mg1190.00$in stockBulk inquiry数量 *SalutationFull name *Company *PhoneEmail *СommentSend requestsulfo-Cyanine5.5 NHS esterNHS 酯形式的水溶性、磺化、远红磺基-Cyanine5.5 染料。显示定价隐藏定价目录。#夸ntityPriceLead timeBuy this product173201 mg110.00$in stock273205 mg290.00$in stock4732025 mg690.00$库存5732050 mg1190.00$库存67320100 mg1850.00$现货批量询价数量*称呼姓名*公司*电话邮箱*Сomment发送请求sulfo-Cyanine5 NHS esterWater-soluble sulfo-Cyanine5用于在水相中标记各种含胺分子的琥珀酰亚胺酯。显示定价隐藏定价Cat. #QuantityPriceLead timeBuy this product133201 mg110.00$库存 233205 mg210.00$in stock4332025 mg410.00$库存5332050 mg695.00$in stock63320100 mg1190.00$库存批量询价数量 *称呼姓名*公司 *电话邮箱 *Сomment发送请求sulfo-Cyanine7 NHS esterssulfo-Cyanine7 NHS ester 是一种水溶性、近红外、胺反应性染料。显示定价隐藏定价目录#QuantityPriceLead timeBuy this product153201 mg110.00$in stock253205 mg290.00$库存4532025 mg690.00$库存5532050 mg1270.00$库存65320100 mg1990.00$现货批量询价数量 *称呼全名 *公司 *电话邮箱 *Сomment发送请求TAMRA NHS ester, 6-isomerNHS -TAMRA 染料的酯，用于通过与氨基反应标记蛋白质、肽和修饰的寡核苷酸。纯 6-异构体。显示定价隐藏定价目录。#QuantityPriceLead timeBuy this product181201 mg110.00$in stock281205 mg210.00$库存4812025 mg410.00$in stock5812050 mg695.00$库存68120100 mg1190.00 $有货批量询价数量 *SalutationFull name *Company *PhoneEmail *СommentSend requestThiazole橙 NHS 酯噻唑橙 NHS ester 用于标记生物分子（肽、蛋白质、氨基 DNA 等）。噻唑橙是一种花青染料，在溶液中基本呈深色，但在双链 DNA 和 RNA 中具有明亮的荧光。显示定价隐藏定价Cat。 #QuantityPriceLead timeBuy this product2183-1mg1 mg– 库存示例请求2183-5mg5 mg60.00$库存样品请求数量*称呼全名*公司*电话电子邮件*Сomment发送请求TR X NHS酯， 5-isomerTR（又名德克萨斯红）是一种基于磺酰罗丹明支架的红色荧光染料，一种胺反应性 NHS 酯。显示定价隐藏定价猫。#QuantityPriceLead timeBuy this product1V2201 mg110.00$in stock2V2205 mg210.00$库存4V22025 mg410.00$库存5V22050 mg695.00$库存6V220100 mg1190.00$6天批量询价数量 *SalutationFull name *Company *PhoneEmail *СommentSend request您的商品已添加。查看您的商品或进行结帐计数项目的数量不正确。